مثير للإعجاب

كيفية جعل 10X TBE الكهربائي العازلة

كيفية جعل 10X TBE الكهربائي العازلة

يتم استخدام TBE و TAE كمخازن مؤقتة في البيولوجيا الجزيئية ، وذلك في المقام الأول من أجل الكهربائي للأحماض النووية. تستخدم المخازن المؤقتة تريس في ظل ظروف الرقم الهيدروجيني الأساسية بعض الشيء ، كما هو الحال بالنسبة للهرم الكهربائي الحمض النووي ، لأن هذا يبقي الحمض النووي قابل للذوبان في المحلول وينبثق منه حتى يتم جذبه إلى القطب الموجب وسوف ينتقل عبر هلام. EDTA هو عنصر في الحل لأن هذا العامل المخلبي الشائع يحمي الأحماض النووية من التحلل بواسطة الإنزيمات. تخلخل EDTA الكاتيونات ثنائية التكافؤ والتي تعتبر عوامل مساعدة للنوى التي قد تلوث العينة. ومع ذلك ، نظرًا لأن الكاتيوم المغنيسيوم عامل مساعد في إنزيم بوليميريز الحمض النووي وأنزيمات التقييد ، فإن تركيز EDTA يظل منخفضًا عن قصد (حوالي 1 ملم تركيز).

10X TBE الكهربائي العازلة المواد

  • 108 غرام من تريس قاعدة تريس (هيدروكسي ميثيل) أمينوميثان
  • 55 غرام من حمض البوريك
  • 7.5 غرام من EDTA ، ملح الصوديوم
  • الماء منزوع الأيونات

استعدادا ل 10X TBE الكهربائي العازلة

  1. حل تريس ، وحمض البوريك ، و EDTA في 800 مل من الماء منزوع الأيونات.
  2. تمييع المخزن المؤقت إلى 1 L. قد يتم صنع كتل بيضاء غير مذابة ليذوب عن طريق وضع زجاجة من الحل في حمام بالماء الساخن. قضيب التحريك المغناطيسي يمكن أن يساعد في هذه العملية.

لا تحتاج لتعقيم الحل. على الرغم من أن هطول الأمطار قد يحدث بعد فترة زمنية ، إلا أن محلول المخزون لا يزال صالحًا للاستخدام. يمكنك ضبط الرقم الهيدروجيني باستخدام عداد الأس الهيدروجيني وإضافة قطرة من حمض الهيدروكلوريك المركز (حمض الهيدروكلوريك). من الجيد تخزين مخزن TBE في درجة حرارة الغرفة ، على الرغم من أنك قد ترغب في تصفية محلول المخزون من خلال مرشح 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات التي من شأنها أن تعزز هطول الأمطار.

10X TBE الكهربائي العازلة التخزين

تخزين زجاجة من 10X الحل العازلة في درجة حرارة الغرفة. سوف التبريد تسريع هطول الأمطار.

باستخدام 10X TBE الكهربائي العازلة

يخفف المحلول قبل الاستخدام. تمييع 100 مل من 10X الأسهم إلى 1 لتر مع الماء منزوع الأيونات.

5X TBE الأسهم الحل وصفة

تتمثل ميزة الحل 5X في أنه من غير المرجح أن يترسب.

  • 54 غرام من قاعدة تريس (Trizma)
  • 27.5 جرام من حمض البوريك
  • 20 مل من 0.5 M EDTA الحل
  • الماء منزوع الأيونات

تجهيز

  1. حل قاعدة تريس وحمض البوريك في حل EDTA.
  2. ضبط درجة الحموضة من الحل إلى 8.3 باستخدام حمض الهيدروكلوريك المركز.
  3. تمييع الحل مع الماء منزوع الأيونات لجعل 1 لتر من محلول المخزون 5X. يمكن أيضًا تخفيف المحلول إلى 1X أو 0.5X للالكهربائي.

باستخدام حل الأسهم 5X أو 10X عن طريق الصدفة ، سوف يعطيك نتائج سيئة لأنه سيتم توليد قدر كبير من الحرارة. بالإضافة إلى إعطائك دقة رديئة ، قد تكون العينة تالفة.

0.5X TBA العازلة وصفة

  • 5X TBE الأسهم الحل
  • الماء منزوع الأيونات المقطر

تجهيز

أضف 100 مل من محلول TBE 5X إلى 900 مل من الماء منزوع الأيونات المقطر. تخلط جيدا قبل الاستخدام.

محددات

على الرغم من أن TBE و TAE هما مخازنان شائعتان للكهربائي الكهربائي ، إلا أن هناك خيارات أخرى للحلول الموصلة منخفضة اللزوجة ، بما في ذلك محلول بورات الليثيوم ومخزن بورات الصوديوم. تكمن مشكلة TBE و TAE في أن المخازن المؤقتة القائمة على Tris تحد من المجال الكهربائي الذي يمكن استخدامه في رحلان كهربائي لأن الشحن الزائد يسبب درجة حرارة منخفضة.


شاهد الفيديو: Preparation of Buffer stocks TBE, TE and TAE - Amrita University (سبتمبر 2021).